产品简介

蛋白质免疫印迹法 (Western Blot ) ，简称WB ，是指通过SDS-PAGE胶将不同分子量的蛋白质分离开，然后将目标蛋白转移到载体(PVDF)膜上，利用抗原抗体的特异性结合，用特异性的一抗结合目标蛋白，用HRP标记的二抗结合一抗，再加以ECL发光液显色，检测组织或者细胞内某种或者某些特异性蛋白质的表达。

服务介绍：

　　蛋白质免疫印迹法 (Western Blot ) ，简称WB ，是指通过SDS-PAGE胶将不同分子量的蛋白质分离开，然后将目标蛋白转移到载体(PVDF)膜上，利用抗原抗体的特异性结合，用特异性的一抗结合目标蛋白，用HRP标记的二抗结合一抗，再加以ECL发光液显色，检测组织或者细胞内某种或者某些特异性蛋白质的表达。蛋白质免疫印迹是做蛋白质分析的一种常规技术，常用于鉴定某种蛋白，并能对蛋白进行定性和半定量分析，还可以用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA、蛋白质-RNA相互作用后续分析。

里来生物技术优势：
（1）高效蛋白提取液进行高质量蛋白的提取，同时高效的蛋白酶抑制剂有效防止蛋白的降解及去磷酸化等作用；
（2）里来生物拥有多年的Western Blot检测经验，为客户提供专业的技术服务；
（3）里来生物为客户设置预实验，根据客户样品具体情况摸索上样量和抗体稀释度。

实验样品要求：
（1）细胞不少于5×10⁶个；
（2）组织样品不少于50mg；
（3）总蛋白浓度不低于 2μg/μl（至少50μl）；

注意事项：
（1）每张膜上做一种目的蛋白和相应的内参蛋白。每张膜上可以做8个样品。一般状况下，2周即可完成实验。如遇特殊情况，如一抗不好，蛋白浓度低或蛋白特殊，如分子量大等，周期会有所延长。

（2）Western Blot细胞蛋白样本的准备及运输：去掉培养液，用PBS洗一次后，加入少量PBS，用细胞刮将细胞刮下，用1ml枪吸取细胞易于1.5ml EP管中，快速离心（升至转速就可stop）去除上清后，可按下面两种方法运输：A.细胞干运输：将细胞干放入液氮速冻，-80℃保存; 如需长途过夜运输，建议干冰运输；如当天送达样本，可用液氮或者-80℃冰袋运输；B.细胞裂解液运输：加入一定量的胞裂解液后即可冷藏运输（冰袋或者冰盒）。如需检测磷酸化蛋白，建议裂解液中加入终浓度1mM的NaF，NaF可抑制磷酸酶活性，保护蛋白磷酸化水平。如果加入裂解液后提取蛋白，则置于冰上裂解1 h，12000rpm离心10 min后取上清，即为蛋白样本。蛋白样本可-20度冷藏运输（建议快递寄送用干冰或者足量-80度冰袋），保存需要-80℃。

（3）蛋白样本运输：蛋白样本需要经过浓度测定，再进行变性，变性时先加入Sample buffer，再95℃ 10 min，Sample buffer可防止变性导致的蛋白沉淀析出。变性的蛋白可直接冷藏运输，-20℃稳定保存。